MTT法及臺(tái)盼蘭拒染法活細(xì)胞增值檢測(cè)服務(wù)

點(diǎn)擊次數(shù)：3251 日期：2013/11/29 13:25:21

一、技術(shù)服務(wù)簡(jiǎn)介
噻唑藍(lán)（MTT）和臺(tái)盼藍(lán)拒染法是判別細(xì)胞活性*常用的兩種方法，MTT法又稱(chēng)MTT比色法，是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線(xiàn)粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測(cè)定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。
二、服務(wù)范圍
應(yīng)用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性或體外藥物對(duì)細(xì)胞增殖活性的影響。
三、收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)
詢(xún)價(jià)
四、服務(wù)周期
實(shí)驗(yàn)費(fèi)用以樣本數(shù)和細(xì)胞株的種類(lèi)數(shù)目計(jì)算。實(shí)驗(yàn)周期為2~3個(gè)星期左右。
五、客戶(hù)須知
1. 寄送：委托單位的試驗(yàn)材料和試劑等均須采用特快專(zhuān)遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運(yùn)輸，以確保實(shí)驗(yàn)物品的安全可靠。
2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，本公司將結(jié)果及時(shí)發(fā)給客戶(hù)：實(shí)驗(yàn)報(bào)告書(shū)，包括IC50、實(shí)驗(yàn)試劑與設(shè)備、實(shí)驗(yàn)過(guò)程、結(jié)果說(shuō)明、原始數(shù)據(jù)、細(xì)胞圖片等
3. 客戶(hù)應(yīng)對(duì)所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶(hù)提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶(hù)承擔(dān)。
六、實(shí)驗(yàn)服務(wù)咨詢(xún)及技術(shù)支持
公司：南京森貝伽生物科技有限公司
電話(huà)：025-66915470
手機(jī)：18602534620
傳真：025-52797049
E-mail：senbeijia@163.com
七、技術(shù)步驟
1. 接種細(xì)胞：收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，每孔加入100ul,鋪板使待測(cè)細(xì)胞調(diào)密度至1000~10000孔，邊緣孔用無(wú)菌PBS填充。
2. 細(xì)胞培養(yǎng)：5% CO2，37℃孵育，至細(xì)胞單層鋪滿(mǎn)孔底（96孔平底板）。
3. 藥物處理：加入濃度梯度的藥物，原則上，細(xì)胞貼壁后即可加藥，或兩小時(shí)，或半天時(shí)間，但我們常在前一天下午鋪板，次日上午加藥.一般5~7個(gè)梯度，每孔100ul，設(shè)3~5個(gè)復(fù)孔。
4. 呈色：5% CO2，37℃孵育16~48小時(shí)，倒置顯微鏡下觀(guān)察。每孔加入20ul MTT溶液（5mg/ml，即0.5% MTT），繼續(xù)培養(yǎng)4h。若藥物與MTT能夠反應(yīng)，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖2~3遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。
5. 溶解：終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。對(duì)于懸浮細(xì)胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加入150ul二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。
6. 比色：在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀OD490nm處測(cè)量各孔的吸光值，記錄結(jié)果，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)。同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔（培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜），對(duì)照孔（細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜）。