流式細胞檢測技術服務

點擊次數(shù)：11330 日期：2013/11/8 8:58:46

一、流式細胞檢測簡介
流式細胞檢測又稱熒光激活細胞分選法，一種細胞分選或分析技術。即以熒光素標記抗體結合相應細胞，用激光束激發(fā)單行流動的細胞，根據(jù)細胞所攜帶熒光(強度或類別)進行分選或分析。
二、實驗服務項目
(1)細胞周期細胞（2）細胞凋亡 (3)免疫細胞分型 (4)表面抗原鑒定 (5)細胞內(nèi)鈣離子檢測 (6)線粒體功能 (7)細胞分選
2、樣本及來源：
1) 單個細胞：1~2×106 個細胞左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
2) 外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
三、客戶提供
（1）標本: 組織、細胞、全血（抗凝）
（2）抗體（熒光素標記）
PE*強，適用于弱表達抗原
FITC*便宜，適用于強表達抗原，適用范圍廣
biotin-avidin不適合弱抗原的檢測
（3）其他試劑（如Fluo-3）
（4）染色試劑盒
客戶得到：滿意的流式細胞儀檢測報告和實驗報告。
四、注意事項：
1、實驗所用的流式細胞儀為COULTER EPICS XL。
2、送檢樣本量：
1)、單個細胞：1~2×106 個細胞左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
2)、外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
3、用戶需要進行流式細胞儀檢測時須提前預約，同時說明實驗目的、方法等。一次送檢標本數(shù)不少于10個。如果一次送檢標本總數(shù)不足10個，每個測試費用為標準收費×2。
4、本實驗室在正式接受實驗委托一周內(nèi)交付實驗結果。所提供實驗結果忠實于樣本的實際情況。
5、用戶須一次性全額預付實驗費。
6、部分常用熒光探針，如PI等，我公司可免費提供，；特殊標記物，如CD抗體等，用戶須另行購買，也可委托我公司代購；用戶所提供抗體應可與樣本發(fā)生特異性識別反應。
7、由用戶提供的樣品或試劑所致的實驗問題由用戶負責。
8、請在表中說明檢測具體要求（可另附頁），由于填寫資料不詳所致任何問題由用戶負責。
9、請在送樣的同時提供樣本來源及處理方法等信息，樣品檢測后原則上本公司不負責保存。
五、流式細胞術檢測樣品推薦制備方法：
A.直接標記抗體（FITC標記抗體）：
(1)、收集1×106個細胞，800rpm離心5min，4℃以上冷PBS洗一次。
(2)、用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘，800rpm離心5min去上清。加2mlPBS重懸洗滌細胞，800rpm離心5min。
(3)、用1ml含5%人血清的PBS重懸細胞，冰上孵育10min，800rpm離心5min去上清。加入200μl含0.5%BSA和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20μl抗體)的PBS,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200μl1%多聚甲醛固定，待測即可。
(4)、用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10000個細胞。
B.未標記抗體間接免疫熒光標記法：
(1)、收集2×106個細胞，用冷的PBS2ml洗滌細胞一次，800rpm離心5min。
(2)、用2ml4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min；2mlPBS重懸細胞，800rpm離心5min；
(3)、用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞，冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)、加入飽和劑量未標記抗體，冰上放置40min,800rpm離心5min，用2ml冷的PBS重懸細胞，800rpm離心5min，洗去未結合一抗，重復一次。
(5)、加入熒光標記（FITC）標記的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm離心5min，去上清，PBS洗滌兩次。
(6)、加入0.5ml1%多聚甲醛重懸細胞；固定待測。
(7)、流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10000個細胞。
C.細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品（PI染色）的制備：
(1)、待測樣本制成單細胞懸液，然后2000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，棄上清。
(2)、用4℃預冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小時。
(3)、調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升，取1毫升細胞懸液，用PBS洗三次，細胞重懸于1毫升PI染液中，37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)、PI染液終濃度為50微克/毫升，RNaseA終濃度為20微克/毫升。
六、如有任何疑問，詳情請電話或 E-mail 咨詢
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